Викладач	Стоянова Л.П.
Предмет	Мікробіологія
Група	2 – А с/с
Дата	Згідно розкладу  28.05.2020
Тема практика 18	Тема:  : Віруси. Індикація та ідентифікація.

СХЕМА ДИСТАНЦІЙНОГО НАВЧАННЯ

Методи індикації та ідентифікації вірусів.

індикація вірусів

Індикацію вірусів, що мають в суперкапсідной оболонці фермент «гемагг-лютінін», можна проводити за допомогою реакції гемаглютинації (РГА). Під дією вірусного гемаглютиніну in vitro відбувається склеювання еритроцитів. В результаті формується осад еритроцитів з нерівними, фестончатими краями, у вигляді «перевернутого парасольки». При негативній реакції, в разі відсутності вірусу в досліджуваному матеріалі, осад еритроцитів має вигляд «гудзики» з рівними краями. РДА - неспецифічна, несерологіческая реакція. Несерологіческая, тому що в ній не бере участь імунна діагностична сироватка. Неспецифічна, тому що різні віруси можуть агглютинировать еритроцити тварин різних видів. Зокрема, вірус грипу добре агглютинирует курячі та людські еритроцити, вірус кліщового енцефаліту - гусячі еритроцити.

Індикацію вірусів можна проводити по їх цітопатогениому дії (ЦПД) на культуру клітин. Ця дія виражається в ушкодженні моношару зараженої культури клітин і зміні їх морфології (дегенерація). При цьому клітини округлюються, темніють, втрачають відростки, в них з'являється зернистість. Можливе утворення багатоядерних клітин (симпласт), зокрема, під дією респіраторно-синцитіальним вірусу. Надалі відбувається відшарування клітин від скла - порушення моношару.

Методи титрування (кількісне визначення) вірусів.

Титрування вірусів здійснюють на різних біологічних моделях.

Якщо вірусом заражають лабораторних тварин, то одиницею виміру сили (дози) вірусу буде LD50.

LD50- то кількість вірусів, яке викликає загибель 50% взятих в досвід тварин певної ваги, певного виду (іноді статі) в певний

термін.

Якщо досліджуваним вірусом заражають курячі ембріони, то титр (доза) вірусу визначається в ED50 (ембріональна доза).

ЕДзо - то кількість вірусів, яке викликає загибель 50% взятих в досвід курячих ембріонів.

Якщо досліджуваним вірусом заражають культуру клітин, то титр вірусу вимірюється в ТЦД50 (тканинна цитопатогенности доза) і БОЮ (бляшкообразующіх одиниця).

ТЦДм - то кількість вірусів, яке викликає загибель 50% взятих в досвід культур клітин.

Більш точним є другий метод, який визначає абсолютне кількість вірусів в досліджуваному матеріалі за кількістю бляшок (БОЮ), тобто ділянок по Гибш клітин культури тканини під дією инфицирующего агента. Скільки утворюється бляшок, стільки і вірусних частинок в досліджуваному матеріалі.

ідентифікація вірусів.

Ідентифікацію вірусів за антигенними властивостями здійснюють постановкою серологічних реакцій зі специфічними діагностичними противірусними сироватками. Основними серологічними реакціями, використовуваними для ідентифікації вірусів, є: реакція гальмування гемахтлютінаціі, реакція нейтралізації в культурі клітин і імуноферментний метод (ІФА).

реакція гальмування гемаглютинації ГРТГА) - 2-х компонентна, складна серологічна реакція. Компоненти реакції:

а) досліджувана віруссодержащего рідина (Аг);

б) типові противірусні діагностичні сироватки (Ат);

в) 1% суспензія еритроцитів (як індикатор).

постановка FIT А складається з наступних етапів: спочатку з'єднують віруссо-держаше рідина з разведениями діагностичних сироваток в лунках полістиролових пластини і залишають для контакту на 30-40 хвилин при кімнатній температурі. Потім в усі лунки вносять суспензію еритроцитів. Облік реакції проводять через 1 -2 години.

Якщо тип вірусу відповідає типу сироватки, то вірусний гемаглютинін буде блокуватися антитілами сироватки, що проявляється відсутністю аглютинації еритроцитів. Така реакція враховується як позитивна. Візуально в лунках визначається осад еритроцитів з рівними краями, у вигляді «гудзика».

З іншими діагностичними противірусними сироватками, взятими для постановки РГГА, реакція буде негативною через невідповідність типу вірусу типу сироватки. Візуально визначається осад еритроцитів з нерівними фестончатими краями, у вигляді «перевернутого парасольки» (гемагглютинация).

РГГА застосовується для ідентифікації вірусів грипу, кліщового енцефаліту.

Реакція нейтралізації (РН) в культурі клітин - 2-х компонентна, складна серологічна реакція. Компоненти реакції:

а) досліджувана віруссодержащего рідина (Аг);

б) типові противірусні діагностичні сироватки (Ат);

в) культура клітин (як індикатор).

постановка РН складається з наступних етапів: спочатку виділений цітопато-генний вірус змішують в пробірках зі специфічними діагностичними сироватками. Суміші витримують 1 годину при кімнатній температурі. Потім цими сумішами заражають флакони з культурою клітин. Якщо тип вірусу відповідає типу сироватки, то відбудеться нейтралізація вірусу антитілами сироватки і культура клітин буде без змін (позитивна реакція).

Тема:віруси Тестові завдання

1. Наука, яка вивчає особливий клас неклітинних форм життя:.

А. Протозоологія

В. Мікроекологія

С. Вірусологія

D. Мікологія

Е. Імунологія

2. Неспецифічний гуморальний противірусний фактор імунітету:

А. Антитіла

В. Інтерферон

С. Гемоглобін

D. Еритроцити

Е. Антигени

3. Здатність вірусів до відтворення називається:

А. Брунькування

В. Поперечний поділ

С. Спороутворення

D. Репродукція

Е. Інвазія

4. При СНІДіуражаються клітини імунної системи:

А. В-лімфоцити

В. Еритроцити

С. Лейкоцити

D. Т-лімфоцити

Е. Макрофаги

5. У практичній медицині для діагностики СНІДу найчастіше застосовують:

А. Електронну мікроскопію

В. Люмінісцентну мікроскопію

С. Імуноферментний аналіз

D. Культивування на живильних середовищах

Е. Вирощування на курячих ембріонах

6. Вірусне захворювання ліквідоване в світі:

А. Епідемічний паротит

В. Вітряна віспа

С. Натуральна віспа

D. Вірусні гепатити

Е. Поліомієліт

7. Захворювання, при якому у клітинах мозкової тканини виявляють тільця Бабеша- Негрі:

А. Натуральна віспа

В. Вітряна віспа

С. Сказ

D. Кір

Е. Епідемічний паротит

8. Структурна частка віруса:

А. Вібріон

В. Віріон

С. Ген

D. Серцевина

Е. Рибосома

9. Структуру віріона досліджують за допомогою:

А. Культур тканин

В. Люмінісцентного мікроскопа

С. Світлового мікроскопа

D. Електронного мікроскопа

Е. Серологічним методом

10. Для дослідження на вірусну інфекцію матеріал транспортують у:

А. Теплому вигляді

В. Металевих контейнерах

С. Посуді, закритому вощаним папером

D. Пластиковому термоізолюючому контейнері

Е. Без особливих застережень

Задачі

1. У пацієнта В. встановлений діагноз: грип

Який досліджуваний матеріал необхідно зібрати?

Які методи діагностики застосовувати?

Відповідь: Необхідно взяти змив з носоглотки . Застосувати вірусологічний метод діагностики – вирощування на культурах клітин.

2. Мисливця покусала лисиця.

Яких профілактичних заходів необхідно вжити?

Відповідь: Необхідно провести щеплення проти сказу та правця.

3. Патологічний матеріал, взятий у пацієнта з підозрою на вірусну інфекцію,. необхідно транспортувати до лабораторії дотримуючись певних умов, щоб не загинув збудник.

Назвіть ці умови.

Відповідь: Матеріал необхідно утримувати при температурі мінус 20ͦºС, транспортувати у сумці-холодильнику.

Література

            Основна

            Люта В.А., Кононов О.В. Мікробіологія: підручник. – К.: Медицина, 2008. – 408-435 с.

            Люта В.А., Кононов О.В. Практикум з мікробіології. – К.: Медицина, 2008.

            Ситник І.О., Климко С.І., Творко М.С. Мікробіологія, вірусологія, імунологія: підручник. – Тернопіль: Укрмедкнига, 1998.

            Додаткова

            Воробьев А.А. и др. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. – М.: Медицинское информационное агенство, 2008.

            Воробьев А.А., Быкова А.С. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. – М.: Медицинское информационное агенство, 2003.

            Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія з вірусологією та імунологією. – К.: Вища школа, 1992.

            Федорович У.М. Спеціальна мікробіологія. – ч. 1. – Л.: Євро світ, 1998.

            Федорович У.М. Спеціальна мікробіологія. – ч. 2. – Л.: Ахілл, 2001

            Федорович У.М. Спеціальна мікробіологія, ч. 3. – Л.: Сплайн, 2008.